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Questions techniques courantes sur l'injection dans la recherche et la vérification des procédés (2)

2021-02-08

21 : Puis-je demander la méthode d'essai utilisée pour déterminer le niveau de contamination et la résistance à la chaleur (valeur D) du microorganisme avant la stérilisation ?

Réponse : le niveau de contamination microbienne est généralement intercepté par filtration sur membrane, puis transféré à la surface d'un milieu solide, où il est cultivé et compté. Le volume de filtration ainsi que le nombre d'organismes capturés doivent être soigneusement ajustés afin d'assurer un taux de détection suffisant (rendement de filtration adéquat) et une comptabilité optimale (éviter qu'un trop grand nombre de microorganismes ne rende impossible leur comptage).

 

22 : Comment calculer la quantité d'inoculation en fonction de la valeur D ?

Réponse : Calcul de la quantité d'inoculation de spores Ni = 10Do(lgNo + 6)/Di
Ni est le nombre d'inoculation des spores thermorésistantes avec l'indicateur biologique ; No est la limite des microorganismes contaminés avant stérilisation ; Do est la valeur D maximale admissible des microorganismes contaminants ; Di est la valeur D de l'indicateur biologique, à savoir les spores thermorésistantes.
 
23 : Pour les produits finaux stérilisés par la méthode de probabilité résiduelle, si la présence de microorganismes dans chaque lot est limitée avant la stérilisation et que le délai d'analyse limite est de 72 heures, alors que le cycle réel continu de production est nettement inférieur à 72 heures, le résultat du test constitue-t-il uniquement une référence pour évaluer le niveau de garantie aseptique du produit stérilisé ?
Réponse : Il est évident que le résultat du test concernant la teneur en microorganismes avant stérilisation reste largement en deçà des exigences du processus de production et n'est pas destiné au contrôle intermédiaire du lot actuel de produits.
L'importance de l'inspection : tout d'abord, évaluer le niveau d'assurance aseptique de ce lot de produits ; ensuite, après avoir accumulé pendant une longue période des données sur la teneur en micro-organismes pour de nombreux lots avant stérilisation, il sera possible d'évaluer globalement l'état de contamination microbienne à chaque étape du système de production avant stérilisation, afin de déterminer si ce système est capable de maîtriser efficacement la contamination microbienne à un bon niveau et s'il nécessite des améliorations.
 
 
24 : Puis-je vous demander quelle est la méthode utilisée pour étudier l'espèce et la quantité des microorganismes ? Quels équipements sont nécessaires ? Si la méthode de probabilité résiduelle est adoptée, est-il nécessaire de déterminer le niveau de microorganismes au cours du processus de production, et quel serait l'augmentation des coûts si cette méthode était mise en place ? En tant que grand fabricant d'infusions, faudrait-il établir un laboratoire microbiologique spécialisé afin de détecter le niveau de contamination microbienne avant la stérilisation par la méthode de probabilité résiduelle ?
Réponse : Le degré de contamination microbienne – c'est-à-dire la quantité – peut être examiné conformément à la méthode d'essai des limites microbiennes décrite dans la Pharmacopée ; les espèces microbiennes peuvent ensuite être identifiées successivement selon les aspects suivants :
1) Observe la morphologie de la colonie à l'œil nu ;
2) Morphologie microscopique et mobilité ;
3) Test biochimique général : coloration de Gram ou test à la soude à 3 % ;
4) Identification biochimique (c'est-à-dire test API) pour identifier l'espèce
Lorsque l'on utilise la méthode de probabilité résiduelle, il convient de déterminer le niveau de contamination microbienne du produit avant la stérilisation, notamment par un test de chaleur sur les bactéries contaminantes (par exemple, à 100 °C pendant 15 minutes) ainsi qu'une détermination précise du nombre de microorganismes présents.
Le laboratoire microbiologique est essentiel pour les fabricants d'injections, et ses fonctions fondamentales doivent inclure le test de la limite microbienne des matières premières et auxiliaires, le test de contamination microbienne avant stérilisation, le test d'asepsie des produits, le test des endotoxines bactériennes ainsi que l'inspection dynamique de l'environnement de production (comptage des particules aériennes, des bactéries volantes et des bactéries sédimentaires). Les laboratoires qualifiés peuvent également effectuer les travaux suivants : identification des microorganismes (il est recommandé que le laboratoire central du groupe réalise l'identification par API), étalonnage des indicateurs biologiques (c'est-à-dire détermination de la valeur D ; il est suggéré que le laboratoire central du groupe d'entreprises effectue ce travail).
 

25 : Est-il nécessaire de vérifier le processus de stérilisation pour la méthode d'over-stérilisation ? Quelle est la différence entre le processus de recherche et développement des produits et la vérification dans la production réelle selon la méthode de probabilité résiduelle ?

Réponse : bien sûr, une vérification est requise. Article 83 de l'annexe CGMP de l'UE : tous les procédés de stérilisation doivent être vérifiés. La méthode de la probabilité résiduelle constitue la conception du processus de stérilisation, qui doit elle-même être vérifiée et confirmée.

 

26 : La méthode d'excès est-elle une garantie que les tests de challenge microbien ne sont pas nécessaires ?

Réponse : La méthode d'over-killing implique que le nombre de microorganismes dans le produit est réduit de 12 logarithmes, et le test de challenge microbiologique vise à prouver que la probabilité résiduelle de présence de microorganismes ne dépasse pas 10⁻⁶. Ainsi, la méthode d'over-killing ne permet pas d'effectuer des tests de challenge microbiologique.

 

27 : Le produit final stérilisé est-il soumis à une vérification distincte des équipements pour chaque variété demandée en enregistrement ? Est-il possible de procéder à une seule vérification des équipements, les autres variétés pouvant alors être utilisées en commun ? Les données relatives à la vérification des équipements peuvent-elles ne pas être jointes aux données de vérification des variétés, mais uniquement conservées à titre de référence archivistique ?

Réponse : Le produit final de stérilisation n'a pas besoin d'être vérifié séparément pour chaque variété soumise à l'enregistrement. Si la variété enregistrée adopte des conditions de stérilisation identiques ou inférieures, seule la vérification de l'équipement effectuée dans les conditions de stérilisation à température plus élevée peut être réalisée ; les données relatives à la vérification de l'équipement pour les conditions de stérilisation spécifiques à cette variété doivent également être jointes aux données de vérification correspondantes.

 

28 : Le processus de stérilisation des formes posologiques non sous forme de solution, des injections semi-solides ou en poudre peut-il permettre de calculer une valeur similaire à F0 ? Est-il possible de déterminer le SAL ? Quelles sont les dispositions spécifiques applicables ?

Réponse : Impossible, mais il est possible de calculer le SAL. Veuillez consulter l'arbre décisionnel pour la sélection du processus de stérilisation de l'UE.

 

29 : Concernant le test de remplissage du milieu de culture, qu'il soit effectué en vérification pour la chaîne de production ou pour les produits déclarés (chaque produit doit être rempli en trois lots à des fins de vérification), puis-je vous demander ?
(1) La vérification de la ligne de production peut-elle remplacer l'essai de remplissage du produit déclaré (variétés similaires) ?
(2) Quel type de milieu souhaitez-vous, thioglycolate et Martin modifié ?
(3) Est-il nécessaire de réaliser trois séries d'essais de remplissage pour différentes spécifications d'emballage lors de l'inspection GMP ?
 
Réponse : (1) Le test de remplissage simulé du milieu de culture doit être effectué en fonction des différents produits, des spécifications d'emballage et des formes d'emballage. Par exemple, si le produit est une injection en poudre, le test de remplissage simulé du milieu consistera généralement à remplir d'abord un milieu liquide, puis à ajouter la poudre aseptique du produit simulé (comme la poudre aseptique PEG). En revanche, pour les injections aseptiques ou les injections en poudre lyophilisée, il suffit de remplir uniquement le milieu liquide. Si les spécifications d'emballage sont de 2 ml, 5 ml ou 10 ml, même pour un même produit, il sera nécessaire d'effectuer son propre test de remplissage simulé du milieu. Enfin, lorsque l'emballage prend la forme de flacons ou d'autres formats (tels que les seringues préremplies ou les ampoules), des tests de remplissage simulés du milieu de culture devront être réalisés séparément, étant donné l'utilisation de lignes de production distinctes.
 
 
(1) Dans le cadre du travail spécifique, compte tenu du fait que l'essai de remplissage par simulation de milieu constitue en réalité une vérification systématique de l'ensemble de la chaîne de production, incluant les équipements de fabrication, l'environnement et les opérations du personnel, etc., si cet essai est effectué dans les conditions les plus défavorables – c'est-à-dire avec le flacon le plus grand, la vitesse de remplissage la plus lente, le plus grand nombre de personnes impliquées, et un temps supérieur à celui de la production normale – alors il devient possible d'effectuer directement l'essai de remplissage par simulation de milieu pour chaque produit et chaque spécification sans avoir à procéder à des tests supplémentaires. En revanche, si les conditions ne sont pas les plus défavorables, l'essai doit être réalisé conformément aux spécifications propres à chaque produit.
 
(2) Le milieu à large spectre est généralement utilisé pour favoriser la croissance des bactéries à gram positif et négatif, ainsi que des levures et des moisissures, comme le milieu de tryptone de soja. En revanche, le milieu anaérobie n'est employé qu'en circonstances spéciales.
 
(3) Uniquement lors de la première vérification, chaque spécification exige trois essais consécutifs réussis de remplissage en simulation médiane, suivis de deux autres fois par an et d'un lot supplémentaire d'essais de remplissage en simulation médiane à chaque occasion.
 
30 : Est-il envisageable d'observer l'effet aseptique du filtre lors du processus de désinfection et d'installation dans le test de remplissage du milieu, après la stérilisation du milieu, avant le remplissage, puis en filtrant à travers la membrane filtrante ?
A : Le test de remplissage avec milieu est une évaluation du niveau d'assurance aseptique appliqué à toutes les étapes, y compris la filtration aseptique. Il est recommandé que le milieu soit préparé et utilisé directement dans les processus de filtration aseptique ainsi que dans les opérations de remplissage ultérieures. En pratique, il convient de veiller à éviter que des particules insolubles ne bouchent le filtre.
 
31 : Combien de lots d'essais de remplissage moyen sont revalidés deux fois par an, chaque année ?
A : Pour la revalidation annuelle d'un produit, la pratique habituelle consiste à effectuer des tests de remplissage moyen deux fois par an, pour chaque lot.
 
32 : Le délai de culture stérile de l'édition 2005 de la Pharmacopée chinoise est passé à 14 jours. Est-il également nécessaire de prolonger le test de culture à deux températures après la simulation et le remplissage du milieu ?
A : Le temps total de culture ne doit pas être inférieur à 14 jours. Il peut être divisé en deux températures différentes (22,5 degrés et 32,5 degrés) pendant au moins 7 jours, ou bien réalisé à une seule température (22,5 degrés) pour une culture directe.
 
 
33. Veuillez expliquer quelle méthode statistique est utilisée et comment calculer le tableau.
Réponse : pour une explication détaillée de la formule de calcul, veuillez vous référer au « Guide de vérification de la production pharmaceutique (2003) » publié par le Département de supervision de la sécurité des médicaments et le Centre d'administration de la certification des médicaments de l'Administration nationale chinoise des produits alimentaires et des médicaments (Éditions de l'Industrie chimique), page 258.
Il existe deux méthodes de calcul. L'une consiste à utiliser la formule approchée de la distribution de Poisson, à savoir : P(X > 0) = 1 - e^(-Np) > 0,95, où P représente la limite de confiance, N le nombre de bouteilles ou de lots simulés, et 0,1 % (probabilité de contamination).
L'autre méthode est une formule binomiale plus précise, à savoir : P(X > 0) = 1 - (1 - X), où P représente la limite de confiance, N le nombre de bouteilles ou de lots, et 0,1 % la probabilité de contamination.
À la page 259 du livre, se trouve un tableau présentant la relation entre la quantité de remplissage simulée, la quantité de pollution et la probabilité de pollution dans un remplissage simulé avec une limite de confiance de 95 %.
 
 
34 : Dans le cinquante-neuvième film, à la page 72 de la fiche distribuée, il est mentionné que les différences dans les procédures de remplissage des milieux ainsi que les similitudes et les différences dans la vérification du processus concernant les injections en poudre, les injections en poudre lyophilisée et les petites injections sont principalement liées à quoi, comment, où et depuis où jusqu'où ?
Réponse : pour l'injection de poudre aseptique, la méthode de remplissage du milieu présente des particularités. Si l'on souhaite préparer une poudre aseptique simulée, il faut ajouter le milieu liquide dans le flacon à l'aide d'une seringue après l'emballage ; ou bien diviser séparément la poudre de milieu aseptique et y ajouter de l'eau stérile pour injection avec une seringue après la finition. Toutefois, l'objectif est d'évaluer le degré de garantie aseptique de l'ensemble du processus d'emballage aseptique.
 
35 : Comment vérifier l'étanchéité des conteneurs ?
A : Des méthodes physiques et microbiologiques sont souvent utilisées pour vérifier l'étanchéité des contenants. La détection physique présente de nombreux avantages, tels qu'une grande sensibilité, une utilisation pratique, une détection rapide et un faible coût. Pendant la période de validité du produit, les méthodes d'essai physique peuvent être employées pour déterminer si l'intégrité de l'emballage répond aux exigences prescrites. Une raison essentielle du contrôle de l'intégrité de l'emballage est de garantir que les produits aseptiques restent stériles.
Par conséquent, lors de la phase de recherche et de développement des emballages de produits, nous devrions envisager d'utiliser un test d'invasion microbienne ou une méthode d'essai physique qui a déjà fait ses preuves et s'avère plus efficace que la détection microbienne pour évaluer l'intégrité des emballages. Toutefois, pour les essais de stabilité du produit durant sa période de validité, il est difficile de réaliser le test d'invasion microbienne ; il est donc recommandé d'adopter la méthode de détection physique. Le test d'invasion microbienne constitue un examen exigeant pour vérifier l'intégrité du système final de stérilisation du contenant et de son système d'étanchéité. Lors de l'essai de validation, on remplit une bouteille d'infusion ou un flacon de cilline (flacon) avec un milieu approprié, puis on stérilise le bouchon et le couvercle directement sur la ligne de production normale. Ensuite, la surface d'étanchéité du contenant est immergée dans une solution bactérienne en mouvement à haute concentration, ce qui permet d'évaluer si des microorganismes ont réussi à pénétrer. Les microorganismes ainsi récupérés sont ensuite cultivés et analysés afin de confirmer l'intégrité du système d'étanchéité du contenant. Parallèlement, un test témoin positif est nécessaire pour garantir la capacité de croissance du milieu de culture.
 
36 : Dans l'utilisation de l'immersion microbienne pour la vérification de l'étanchéité des conteneurs, pourquoi faut-il retirer à l'avance le couvercle en aluminium ? Après avoir enlevé le couvercle en aluminium, ne reste-t-il qu'un bouchon en caoutchouc ? Par conséquent, lors de l'essai, pourrait-il y avoir une fuite de liquide affectant ainsi les résultats de la vérification ?
A : L'enlèvement de la couverture en aluminium vise à créer des conditions plus rigoureuses. Dans le cours, l'injection de poudre lyophilisée est prise comme exemple. Généralement, une haute dépression règne dans le récipient, ce qui empêche toute fuite. Le testeur peut déterminer si l'enlèvement de la couverture en aluminium est approprié en fonction des caractéristiques de son produit.
 
37 : Lors de la validation de l'étanchéité, par exemple lors de la validation des fûts en aluminium, les résultats ne peuvent pas être observés par une vérification au moyen du produit. Existe-t-il une autre méthode ?
A : pour les conteneurs de matières premières aseptiques, il est recommandé d'essayer des méthodes physiques, telles que l'infiltration par saumure.
 
38 : Quelle est la quantité générale d'échantillonnage par validation de fuite, et quel est le délai de revalidation ?
Réponse : on peut prélever au moins 10 bouteilles, réparties aux début, milieu et fin de la ligne d'étanchéité, pour procéder à l'essai. La vérification initiale doit examiner les propriétés d'étanchéité à différents moments pendant la période de validité, puis confirmer que ce contrôle peut être effectué une fois par an.
 
39 : Les directives de validation prévoient des exigences en matière de vérification de l'étanchéité pour les produits de perfusion volumineux, mais aucune exigence n'est établie pour les produits conditionnés individuellement et les produits lyophilisés. N'y a-t-il donc pas besoin de procéder à une vérification de l'étanchéité ?
A : Les injections en grand volume, les injections en petit volume et les injections de poudre doivent faire l'objet d'une vérification de l'étanchéité du contenant.
 
40 : Les tests d'étanchéité des conteneurs sont-ils requis pour toutes les formulations injectables, telles que les ampoules et les flacons de solution saline ?
A : Le test d'étanchéité des conteneurs doit être effectué pour toutes les formes galéniques injectables, telles que les ampoules et les flacons de solution saline. Toutefois, les méthodes utilisées diffèrent : la méthode physique est généralement employée pour les ampoules, tandis que les méthodes physiques et microbiologiques sont appliquées aux flacons de sérum physiologique.